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Super Green I(電泳級)
  • 產(chǎn)品貨號:
    BN20133
  • 中文名稱:
    Super Green I(電泳級)
  • 英文名稱:
    SYBR Green I
  • 品牌:
    Biorigin
  • 貨號

    產(chǎn)品規(guī)格

    售價

    備注

  • BN20133-50μl

    50μl

    ¥340.00

產(chǎn)品描述

保存條件:4 °C 避光保存 

本品用 DMSO 溶解,因 DMSO 的熔點是 18.5℃,使用前請放置到室溫充分溶解。

一、膠染法(用法同 EB)(推薦方法,見圖 1)

1、制膠時加入 SUPER Green I 核酸染料。冷卻膠至 50℃左右,每 100ml 膠中加入 3~5μl SUPER Green I 核酸染料。 

2、按照常規(guī)方法進行電泳即可。 

注:此方法染色可以準(zhǔn)確確定核酸片段分子量,染料用量相對較少。1ml 染料大約可以做 300 塊 100ml 的膠。

二、點染法 (見圖 3)

1、該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和 PAGE 凝膠電泳。 

2、工作液的配制:用電泳緩沖液將 10000×的 SUPER Green I 稀釋 100 倍,即為 SUPER Green I 工作液。SUPER Green I 工作液可以置 2~8℃保存一個月以上。 

3、制膠:按常規(guī)方法制膠,不含任何染料。 

4、樣品染色:向分析樣品中加入 SUPER Green I 工作液和載樣緩沖液,室溫放置 10 分 鐘,使 SUPER Green I 與樣品中 DNA 充分結(jié)合。SUPER Green I 工作液加入量為總上 樣量的 1/5~ 1/10。 

5、DNA Marker 染色:將 5μl DNA Marker、5μl DNA Marker 稀釋液和 1μl SUPER Green I 工作液混勻,室溫放置 5 分鐘,使 SUPER Green I 與 DNA 充分結(jié)合。 

6、上樣、電泳:按常規(guī)操作。 注:用點染法染色時,靈敏度最高,染料用量最少。但大片段稍有滯后現(xiàn)象,如果需要更準(zhǔn) 確確定分子量(與 Marker 對比),建議使用膠染法。  

三、泡染法

 1、按照常規(guī)方法進行電泳。 

 2、用 pH 7.0~8.5 的緩沖液(如:TAE,TBE 或 TE),按照 10000﹕1 的比例稀釋 SUPER Green I 濃縮液,混勻,制成染色溶液。 

3、將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫 振蕩染色 10~30 分鐘,染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿 上染色,將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上,讓稀釋液均勻地覆蓋整個膠板,并染色 30 分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)。 

注:用泡染法染色時,可以精確確定核酸片段分子量。但染料用量是三種方法中最多的。

四、點染+膠染法(見圖 2)

此法結(jié)合方法 1 和方法 2,靈敏度最高,對于低濃度樣本比 EB 檢測更靈敏。幾種染色方法特點比較 

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SUPER Green I 使用注意事項

1、在 SUPER Green I 點染法中,電泳時間不要超過 2 小時,否則 SUPER Green I 會從 DNA 上分離出來,會產(chǎn)生彌散狀條帶。 

2、用點染方法染色時,條帶稍有滯后現(xiàn)象,如果需要確定片段精確分子量(與 Marker 對比), 建議使用膠染法(方法 1)。 

3、在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中,SUPER Green I 可以全部從雙鏈核酸上去掉。 

4、如果想對用 SUPER Green I 染過的膠進行 Southern blots,建議在預(yù)雜化和雜化溶液 中加入 0.1%~0.3% 的 SDS。 

5、在紫外照射透視下,與雙鏈 DNA 接合的 SUPER Green I 呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含 有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。 

6、SUPER Green I 對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等 使用過程中用聚丙烯類容器。

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