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    FUJIFILM Wako和光純藥質譜級賴氨酰肽鏈內切酶

    質譜級賴氨酰肽鏈內切酶

    Lysyl Endopeptidase

    本產(chǎn)品是質譜分析前處理時最常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶,該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽,可用于蛋白測序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶,可更好地切斷賴氨酸 基團的多肽,增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。

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    來源:細菌

    外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl緩沖液,pH 8)
    活性:0.03~0.07 AU/vial
    分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)
    溶解性:溶于水或緩沖液
    穩(wěn)定性:溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中,可在4℃穩(wěn)定保存2年;在pH值6.0-11.0 30℃時能穩(wěn)定保存,但溫度超過50℃時不穩(wěn)定。
    最適pH值:9.0~9.5
    等電點:6.9~7.0 
    底物特異性:
    可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA
    不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA
    抑制劑:DFP,PMSF,TLCK

    ◆特點

    ●  高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析

    ●  提高裂解效率、增加肽段數(shù)量
    ●  根據(jù)使用量特意制備小包裝,方便使用

    ◆應用
    分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內切酶 (Lys-C) 和Tp與Lys-C聯(lián)用進行膠內酶切的效果比較。
    牛血清蛋白BSA 的條帶(100 ng) 通過SDS-PAGE 獲得,然后分別用Tp、Lys-C和Lys-C+Tp進行酶切,再用MALDI-TOFMS法進行分析。
    這些蛋白酶的實驗效果見下表。

    表 1:Tp、Lys-C和Lys-C+Tp的結果對照
    這些結果表明Lys-C酶解的錯誤裂解率最低。Tp酶解時加入Lys-C后,錯誤裂解率有所降低,同時,可以鑒定出更多的多肽。

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    胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴氨酰肽鏈內切酶 (Lys-C)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質譜結果對照圖。

    Lys-C+Tp酶切后,可以在m/z=2000時得到吸收峰,而單獨的Tp酶切在m/z=2000時沒有吸收峰。該結果表明Lys-C可以提高測序覆蓋度。
    ( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )


    ◆賴氨酰肽鏈內切酶

    賴氨酰肽鏈內切酶,最初由Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵,用于蛋白測序和Lys-X化合物的酶催化合成。該酶穩(wěn)定性高,在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時之后,仍然擁有完整的生物活性。

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    ◆產(chǎn)品列表

    品牌編號產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品等級
    FUJIFILM Wako125-05061賴氨酰肽鏈內切酶,MS級20 μg×5質譜級


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