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    FUJIFILM wako 125-05061質譜級賴氨酰肽鏈內切酶 Lysyl Endopeptidase?

    質譜級賴氨酰肽鏈內切酶2716721237416971.jpg

    Lysyl Endopeptidase?

    image.png

      本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶,該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽,可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶,可更好地切斷賴氨酸基團的多肽,增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個樣品的凝膠內消化。


    來源:細菌

    外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 緩沖液,pH8)

    活性:0.03~0.07 AU/vial

    分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)

    溶解性:溶于水或緩沖液

    穩定性:溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中,可在4℃穩定保存2年;在 pH 值 6.0-11.0、30℃時能穩定保存,但溫度超過50℃時不穩定。

    最適pH值:9.0~9.5

    等電點:6.9~7.0 

    底物特異性:

    可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

    不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

    抑制劑:DFP、PMSF、TLCK



    特點


    ●  高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析

      提高裂解效率、增加肽段數量

      根據使用量特意制備小包裝,方便使用



    應用


      分別采用胰蛋白酶(Tp、賴氨酰肽鏈內切酶(Lys-C)和 Tp與Lys-C 聯用進行膠內酶切的效果比較。

      牛血清蛋白 BSA 的條帶(100 ng)通過 SDS-PAGE 獲得,然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進行酶切,再用 MALDI-TOFMS 法進行分析。

      這些蛋白酶的實驗效果見下表。


    表 1:Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結果對照

    這些結果表明 Lys-C 酶解的漏切位點數(Missed Cleavage)最少。Tp 酶解時加入 Lys-C 后,漏切位點數有所降低,同時,可以鑒定出更多的多肽。



    Tp 

    Lys-C

    Lys-C+Tp

    裂解位點

    精氨酸和賴氨酸的C端 

    賴氨酸的C端 

    精氨酸和賴氨酸的C端

    漏切位點數

    (漏切位點所占比例)

    多(8%)

    很少(0%)

    少(3%)

    鑒定出的多肽數量 

    17

    19

    22

    image.png

    胰蛋白酶(Tp)(圖 a)和賴氨酰肽鏈內切酶(Lys-C)+Tp( 圖 b)酶切后的質譜結果對照圖。

    Lys-C+Tp 酶切后,可以在 m/z=2000 時得到吸收峰,而單獨的 Tp 酶切在 m/z=2000 時沒有吸收峰。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。

     

    ( 數據由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada 博士提供 )



    賴氨酰肽鏈內切酶


      賴氨酰肽鏈內切酶,最初由 Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵,用于蛋白測序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩定性高,在4M尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育6小時之后,仍然擁有完整的生物活性。


    外觀

      凍干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8)

    活性

      見包裝

    分子量

      27,000(凝膠過濾);30,000 (SDS-PAGE)

    溶解性

      易溶于水或緩沖液

    最佳pH

      9.0-9.5(酰胺酶的最佳活性 pH)

    等電點

      6.9-7.0

    抑制劑

      DFP、PMSF、TLCK

    來源

      細菌

    穩定性

     溶于pH 值 5.0-12.0 的緩沖液中,可于4℃穩定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的緩沖液中,可于30℃穩

     定保存,但是50℃及以上不穩定。

    單位定義

     一單位酰胺酶(AU)指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產生1 μmol 對硝基苯胺所需的酶量。

    底物特異性

     水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

     非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA


    ※ 本頁面產品僅供研究用,研究以外不可使用。



    產品列表

    產品編號產品名稱產品規格產品等級備注
    125-05061Lysyl Endopeptidase?, MS Grade 
    賴氨酰肽鏈內切酶,MS級
    20 μg×5質譜級-
    050-05941Endoproteinaseglu C, Sequencinggrade 
    測序級谷氨酰蛋白內切酶Glu-C
    50 μg生物化學分析級-
    202-15951Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometrygrade 
    豬胰腺胰蛋白酶質譜級別
    20 μg×5質譜級-



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