產(chǎn)品信息：

本試劑盒有效期為一年

產(chǎn)品簡介: 

Bradford 蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一，其實(shí)驗(yàn)原理是根據(jù)考馬斯亮藍(lán)(Coommassie Brilliant Blue)G-250與蛋白質(zhì)的堿性和芳香族氨基酸特別是精氨酸（Arginine） 在酸性介質(zhì)中結(jié)合后，溶液轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，使染料的最大吸收峰從 465nm 遷移到 595nm，且測定的吸光 值與蛋白濃度成正相關(guān)關(guān)系；即可通過測定蛋白在 595nm 處的吸光度，推算蛋白濃度，進(jìn)而進(jìn)行定量測定。 

本法通過吸光值，推算蛋白濃度，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高，比 Lowry 法大約高四倍，測定速度快、簡單，僅需一種試劑即可，且不受大多數(shù)樣品中化學(xué)試劑的影響。

注意事項(xiàng)： 

1. Bradford 染色液使用前，需將其恢復(fù)至室溫，有利于提高檢測的靈敏度；并在使用前充分混勻

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線也有輕微的非線性，因而不能用 Beer 定律進(jìn)行計(jì)算，而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定未知蛋白質(zhì)的濃度；為了得到更精確的結(jié)果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔，每次試驗(yàn)都必須建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 

3. Bradford 法測定蛋白濃度對(duì)大多數(shù)化學(xué)物質(zhì)的兼容性比較好，比如對(duì)還原劑 DTT 的兼容性高達(dá) 5mM；但會(huì)受到略高濃度的去垢劑影響，需確保 SDS 低于 0.01%，Triton X-100 低于 0.05%，Tween  20/ 60/80 低于 0.015%等 

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

使用說明： 

一．配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系（線性范圍 100-1500ug/ml）： 

可參考下表配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品梯度 ，并充分混勻，避免氣泡生成：

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液原則上應(yīng)與為蛋白樣品的溶解液一致，但也可用蒸餾水、生理鹽水或 PBS 進(jìn)行稀釋

二. 蛋白濃度測定： 

（1）分別取 5μl 不同濃度蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入 96 孔板中；若樣品不足，可以用稀釋液進(jìn)行稀釋，但須記錄樣品稀釋比例 

（2）各孔加入 200μl G250 染色液，充分振蕩混勻，室溫孵育 2-3min 

（3）用酶標(biāo)儀測定 595nm 處的吸光度

（4）以標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度（ug/ml）為橫坐標(biāo)，用 OD 值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測出的待測樣品的 A595 值，即可得出樣品的蛋白質(zhì)濃度，進(jìn)而進(jìn)行定量計(jì)算

參考標(biāo)準(zhǔn)曲線：